野生木香丛生芽诱导因素的研究.PDF
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2006年2月23日
第1页 |
参见附件(77KB,3页)。
野生木香丛生芽诱导因素的研究
余晓丽
(南阳师范学院生物系,河南南阳 473061)
摘要: 用野生木香的带腋芽茎段作外植体进行组织培养 ,试验结果表明:在 5 月份取其茎段的中部作外植
体 ,70 %酒精表面灭菌5 s ,0. 1 %升汞溶液灭菌8~10 min ,表面灭菌方式效果最好;利于诱导的培养基为MS + 2. 0
mg L 6 - BA + 0. 1 mg L NAA ,利于继代的培养基为MS + 2. 0 mg L 6 - BA + 0. 05 mg L NAA ,温度 23. 5~24 ℃、光
照10 h d、光强3 000 lx、蔗糖3 %。
关键词: 野生木香; 组织培养; 丛生芽
中图分类号: S6871336 文献标识码: A 文章编号:1002 - 1302(2005) 01 - 0076 - 02
收稿日期:2004 - 08 - 20
基金项目:河南省南阳市 2004 年科技攻关项目(编号:200404016)和
南阳师范学院2003年应用与科技开发项目(编号:nytc200318) 。
作者简介:余晓丽(1963—) ,女,河南南阳人,副教授,从事植物细胞
培养研究工作。Tel : (0) 13838721912 ; E - mail :yxll268 @sina. com。
木香( Rosa banksiae Aiton) ,蔷薇属 ,半常绿攀援
性灌木 ,攀援高度可达6 m。经长期栽培观察 ,木香
作砧木 ,其寿命、粗度、抗逆性优于其他砧木。但目
前木香砧木的取得主要是从山上直接采伐 ,而长久
如此会耗竭、破坏生态。采用植物组织培养方法可
以快速繁殖木香 ,既可以保护资源 ,又可以满足市场
的需要。木香的组织培养国内外未见报道。
1 外植体的选择和灭菌
在5~7月选取木香的茎段 ,并对茎段不同部位
取材(包括茎部的顶部、中部、底部) ;用自来水和洗
涤剂洗涤 ,无菌水冲洗干净 ,经 70 %酒精处理 5 s
后 ,用 0. 1 %升汞溶液分别采用 6~8 min、 8~10
min、 15 min 3 种处理对外植体灭菌 ,然后放入无菌
水冲洗4次 ,每次10 min ,并轻轻摇动。每种处理20
个外植体 ,重复3次。灭菌后在无菌操作下 ,切去两
端已褪色的组织 ,将茎段切成 1. 0~1. 5 cm长的小
段(两端距芽留有一段距离) ,接入诱导分化培养基
中 ,每瓶接1个外植体。于接种后 5 d、 11 d、 21 d 后
观察茎段的污染率、褐化死亡率、存活率等情况 ,比
较不同表面灭菌方式的灭菌效果 ,筛选最适外植体
处理方式。
从表 1 的试验结果可以看出:不同的表面灭菌
方式 ,其效果是不一样的 ,其中70 %酒精表面灭菌 5
s后用 0. 1 %升汞溶液灭菌 8~10 min 处理外植体 ,其成活率高达80 % ,污染率10 % ,褐化死亡率10 % ,为3种表面灭菌方式中效果最好的。试验结果还可
看出 ,取茎段的中部 ,其成活率高于顶部和底部;5
月份取材比6月份、 7 月份取材成活率高;在 5 月份
取茎段的中部作外植体 ,成活率高 ,丛生芽分化快 ,增殖多 ,生长快 ,苗势壮。
表1 不同表面灭菌方式对木香茎段诱导分化的影响
项 目
表面灭菌方式
处理一 处理二 处理三
接种茎段总数(个) 20 20 20
污染茎段数(个) 8 2 0
茎段污染率( %) 40 10 0
褐化死亡茎段数(个) 1 2 12
茎段褐化死亡率( %) 5 10 60
成活茎段数(个) 11 16 4
茎段成活率( %) 55 80 20
注:处理一为70 %酒精5 s ,0. 1 %升汞6~8 min ;处理二为70 %
酒精5 s ,0. 1 %升汞8~10 min ;处理三为70 %酒精5 s ,0. 1 %升汞15
min。
2 不同激素配比对诱导分化的影响
将无菌外植体接入诱导分化的培养基[1 ,2 ]
(基
本培养基为MS)上 ,在培养 5 d、 11 d、 21 d 后分别观
察愈伤组织萌发、丛生苗生长情况 ,试验结果见
表2。
由表 2 可以看出 ,以 6 - BA 为 2. 0 mg L、 NAA
为0. 1 mg L 的组合配方最佳。该组合侧芽 5 d 内
即开始陆续萌动 ,11 d丛生苗长至0. 1~0. 5 cm ,21
— 67 — 江苏农业科学 2005年第1期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.表2 不同激素配比对木香形成丛生苗的影响
处理
不同激素配比
6 - BA
(mg L)
NAA
(mg L)
平均诱导
丛生苗数
(个)
丛生苗生长势
1 1. 0 0. 1 3~4. 5 + + + + (一半长愈伤、一半长苗)
2 1. 5 0. 1 4~5 + + + + + (伴有少量愈伤)
3 2. 0 0. 1 6. 5 + + + + + + + (偶有愈伤)
4 2. 5 0. 1 2. 5 + + + (伴有愈伤)
5 2. 0 0. 5 3~4 + + + (伴有愈伤)
6 2. 0 1. 0 1. 5 + + (伴有愈伤)
7 2. 0 0 0 0 (全部为愈伤组织)
注:每处理30瓶 ,试验重复3次 ,诱导丛生苗个数及丛生苗生长势为 3次
平均值 ......
余晓丽
(南阳师范学院生物系,河南南阳 473061)
摘要: 用野生木香的带腋芽茎段作外植体进行组织培养 ,试验结果表明:在 5 月份取其茎段的中部作外植
体 ,70 %酒精表面灭菌5 s ,0. 1 %升汞溶液灭菌8~10 min ,表面灭菌方式效果最好;利于诱导的培养基为MS + 2. 0
mg L 6 - BA + 0. 1 mg L NAA ,利于继代的培养基为MS + 2. 0 mg L 6 - BA + 0. 05 mg L NAA ,温度 23. 5~24 ℃、光
照10 h d、光强3 000 lx、蔗糖3 %。
关键词: 野生木香; 组织培养; 丛生芽
中图分类号: S6871336 文献标识码: A 文章编号:1002 - 1302(2005) 01 - 0076 - 02
收稿日期:2004 - 08 - 20
基金项目:河南省南阳市 2004 年科技攻关项目(编号:200404016)和
南阳师范学院2003年应用与科技开发项目(编号:nytc200318) 。
作者简介:余晓丽(1963—) ,女,河南南阳人,副教授,从事植物细胞
培养研究工作。Tel : (0) 13838721912 ; E - mail :yxll268 @sina. com。
木香( Rosa banksiae Aiton) ,蔷薇属 ,半常绿攀援
性灌木 ,攀援高度可达6 m。经长期栽培观察 ,木香
作砧木 ,其寿命、粗度、抗逆性优于其他砧木。但目
前木香砧木的取得主要是从山上直接采伐 ,而长久
如此会耗竭、破坏生态。采用植物组织培养方法可
以快速繁殖木香 ,既可以保护资源 ,又可以满足市场
的需要。木香的组织培养国内外未见报道。
1 外植体的选择和灭菌
在5~7月选取木香的茎段 ,并对茎段不同部位
取材(包括茎部的顶部、中部、底部) ;用自来水和洗
涤剂洗涤 ,无菌水冲洗干净 ,经 70 %酒精处理 5 s
后 ,用 0. 1 %升汞溶液分别采用 6~8 min、 8~10
min、 15 min 3 种处理对外植体灭菌 ,然后放入无菌
水冲洗4次 ,每次10 min ,并轻轻摇动。每种处理20
个外植体 ,重复3次。灭菌后在无菌操作下 ,切去两
端已褪色的组织 ,将茎段切成 1. 0~1. 5 cm长的小
段(两端距芽留有一段距离) ,接入诱导分化培养基
中 ,每瓶接1个外植体。于接种后 5 d、 11 d、 21 d 后
观察茎段的污染率、褐化死亡率、存活率等情况 ,比
较不同表面灭菌方式的灭菌效果 ,筛选最适外植体
处理方式。
从表 1 的试验结果可以看出:不同的表面灭菌
方式 ,其效果是不一样的 ,其中70 %酒精表面灭菌 5
s后用 0. 1 %升汞溶液灭菌 8~10 min 处理外植体 ,其成活率高达80 % ,污染率10 % ,褐化死亡率10 % ,为3种表面灭菌方式中效果最好的。试验结果还可
看出 ,取茎段的中部 ,其成活率高于顶部和底部;5
月份取材比6月份、 7 月份取材成活率高;在 5 月份
取茎段的中部作外植体 ,成活率高 ,丛生芽分化快 ,增殖多 ,生长快 ,苗势壮。
表1 不同表面灭菌方式对木香茎段诱导分化的影响
项 目
表面灭菌方式
处理一 处理二 处理三
接种茎段总数(个) 20 20 20
污染茎段数(个) 8 2 0
茎段污染率( %) 40 10 0
褐化死亡茎段数(个) 1 2 12
茎段褐化死亡率( %) 5 10 60
成活茎段数(个) 11 16 4
茎段成活率( %) 55 80 20
注:处理一为70 %酒精5 s ,0. 1 %升汞6~8 min ;处理二为70 %
酒精5 s ,0. 1 %升汞8~10 min ;处理三为70 %酒精5 s ,0. 1 %升汞15
min。
2 不同激素配比对诱导分化的影响
将无菌外植体接入诱导分化的培养基[1 ,2 ]
(基
本培养基为MS)上 ,在培养 5 d、 11 d、 21 d 后分别观
察愈伤组织萌发、丛生苗生长情况 ,试验结果见
表2。
由表 2 可以看出 ,以 6 - BA 为 2. 0 mg L、 NAA
为0. 1 mg L 的组合配方最佳。该组合侧芽 5 d 内
即开始陆续萌动 ,11 d丛生苗长至0. 1~0. 5 cm ,21
— 67 — 江苏农业科学 2005年第1期
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.表2 不同激素配比对木香形成丛生苗的影响
处理
不同激素配比
6 - BA
(mg L)
NAA
(mg L)
平均诱导
丛生苗数
(个)
丛生苗生长势
1 1. 0 0. 1 3~4. 5 + + + + (一半长愈伤、一半长苗)
2 1. 5 0. 1 4~5 + + + + + (伴有少量愈伤)
3 2. 0 0. 1 6. 5 + + + + + + + (偶有愈伤)
4 2. 5 0. 1 2. 5 + + + (伴有愈伤)
5 2. 0 0. 5 3~4 + + + (伴有愈伤)
6 2. 0 1. 0 1. 5 + + (伴有愈伤)
7 2. 0 0 0 0 (全部为愈伤组织)
注:每处理30瓶 ,试验重复3次 ,诱导丛生苗个数及丛生苗生长势为 3次
平均值 ......
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